yy.vip易游-荧光分光光度计的原理及应用

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　　基态 ( S0 )→激发态 ( S1、S2 激发态振动能级 ) ：吸收特 定频率的辐射。 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最 快、激发态寿命最短的途径占优势；

　　与有机试剂配合物后测量；可测量约60多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定；

　　固定激发光波长, 化合物发射的荧光强 度与发射光波长关系 曲线(图中曲线II)。 问题：荧光(磷光)的 激发光波长如何选择 ？Stokes位移：激发 光谱与发射光谱之间 的波长差值。发射光 谱的波长比激发光谱 的长。

　　测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品 池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器成直角。 基本流程如图： 单色器：选择激发光波长 的第一单色器和选择发射 光(测量)波长的第二单色器 ； 光源：氙灯 ? 和高压汞灯， 染料激光器 检测器：光电倍增管。

　　标准曲线法定量： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标 准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度

　　（1）灵敏度高 比紫外 - 可见分光光度法高 2 ～ 4 个数量级；为什 么？ 分光光度法所检测的是两个较大的信号的微小差 别，荧光光度法检测的是很小背景值上的荧光强度 。 （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱 ； （3）试样量少 （4）可提供比较多的物理参数 缺点：应用范围小。